液相色譜儀作為分析檢測(cè)領(lǐng)域的核心設(shè)備，其分離與檢測(cè)精度直接決定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。氣泡干擾是液相色譜儀運(yùn)行中最常見(jiàn)的故障之一，輕則導(dǎo)致基線漂移、峰形畸變，重則引發(fā)保留時(shí)間不穩(wěn)定、檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性差，甚至損壞色譜柱與檢測(cè)器。據(jù)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備運(yùn)維數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，約35%的液相色譜儀故障與氣泡問(wèn)題直接相關(guān)。本文結(jié)合實(shí)驗(yàn)室實(shí)操經(jīng)驗(yàn)與設(shè)備原理，系統(tǒng)梳理氣泡產(chǎn)生的核心成因，提供分場(chǎng)景的精準(zhǔn)處理方案，為實(shí)驗(yàn)室人員解決氣泡難題提供技術(shù)支撐。
一、氣泡產(chǎn)生的四大核心成因
液相色譜儀的氣泡主要源自流動(dòng)相制備、系統(tǒng)密封性、設(shè)備運(yùn)行狀態(tài)及操作流程四大環(huán)節(jié)，不同成因的氣泡在系統(tǒng)中的分布與表現(xiàn)存在顯著差異。
流動(dòng)相制備不當(dāng)是氣泡產(chǎn)生的首要源頭。其一，溶劑純度不足或儲(chǔ)存不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致溶解氧超標(biāo)，尤其是甲醇、乙腈等常用有機(jī)溶劑，在常溫常壓下可溶解約8-10mg/L的氧氣，當(dāng)流動(dòng)相溫度升高或壓力驟降時(shí)，溶解氧會(huì)釋放為游離氣泡。其二，混合流動(dòng)相時(shí)若采用劇烈攪拌或快速傾倒，會(huì)混入大量空氣，形成肉眼可見(jiàn)的氣泡，若未充分脫氣直接使用，氣泡會(huì)隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜系統(tǒng)。其三，流動(dòng)相儲(chǔ)存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或儲(chǔ)液瓶密封不嚴(yán)，會(huì)導(dǎo)致二氧化碳等氣體重新溶解，尤其是含水流動(dòng)相在室溫下放置超過(guò)24小時(shí)，氣泡風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加60%。
系統(tǒng)密封性與部件老化是氣泡引入的關(guān)鍵路徑。輸液泵密封圈磨損、進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)子密封不嚴(yán)、色譜柱接頭松動(dòng)等問(wèn)題，會(huì)使外界空氣在壓力差作用下進(jìn)入系統(tǒng)。例如，輸液泵在吸液過(guò)程中，若單向閥密封不良，會(huì)在吸液沖程時(shí)吸入空氣，形成周期性氣泡；進(jìn)樣閥使用超過(guò)5000次后，轉(zhuǎn)子密封面磨損，進(jìn)樣時(shí)會(huì)帶入空氣，導(dǎo)致進(jìn)樣體積不準(zhǔn)確并產(chǎn)生氣泡。此外，管路死體積過(guò)大或彎度過(guò)急，會(huì)使流動(dòng)相流速突變，引發(fā)壓力波動(dòng)，促使溶解氣體釋放。
設(shè)備運(yùn)行參數(shù)設(shè)置不合理也會(huì)誘發(fā)氣泡問(wèn)題。輸液泵流速過(guò)高時(shí)，流動(dòng)相在管路中形成湍流，會(huì)將溶解的氣體攪成微小氣泡；柱溫箱溫度設(shè)置過(guò)高，超過(guò)流動(dòng)相的脫氣溫度，會(huì)使溶解氣體快速釋放，尤其是在色譜柱入口處形成氣泡堆積。檢測(cè)器流通池溫度與柱溫存在較大溫差時(shí)，流動(dòng)相溫度驟變，也會(huì)導(dǎo)致氣泡析出，影響紫外檢測(cè)或熒光檢測(cè)的信號(hào)穩(wěn)定性。
操作流程不規(guī)范是氣泡問(wèn)題的常見(jiàn)誘因。實(shí)驗(yàn)前未對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行充分排氣，會(huì)導(dǎo)致管路中殘留空氣；更換流動(dòng)相時(shí)未及時(shí)沖洗管路，兩種溶劑混合產(chǎn)生放熱或吸熱反應(yīng)，會(huì)引發(fā)氣泡生成；進(jìn)樣操作時(shí)若進(jìn)樣針內(nèi)存在氣泡，或進(jìn)樣速度過(guò)快，會(huì)將空氣帶入進(jìn)樣閥，進(jìn)而進(jìn)入色譜柱。
二、氣泡的精準(zhǔn)處理與排除方法
針對(duì)不同成因與分布位置的氣泡，需采用差異化的處理方法，核心原則是“源頭控制、分段排氣、精準(zhǔn)排查"，確保氣泡排除且不影響系統(tǒng)性能。
流動(dòng)相脫氣是源頭控制的核心手段。常用的脫氣方法包括真空脫氣、超聲脫氣、氦氣脫氣三種。真空脫氣適用于單組分溶劑，將溶劑置于真空脫氣裝置中，在-0.09MPa真空度下脫氣20分鐘，可去除90%以上的溶解氣體；超聲脫氣適合混合流動(dòng)相，將儲(chǔ)液瓶放入超聲清洗儀中，在40kHz頻率下超聲30分鐘，可有效消除肉眼可見(jiàn)的氣泡，但對(duì)溶解氣體的去除率僅為60%-70%；氦氣脫氣是精度的方法，將氦氣以5-10mL/min的流速通入流動(dòng)相，氦氣會(huì)置換出溶解的空氣，脫氣后可保持4小時(shí)無(wú)氣泡，適用于梯度洗脫等高精度分析場(chǎng)景。
系統(tǒng)分段排氣是快速排除氣泡的關(guān)鍵步驟。輸液泵排氣時(shí)，先將吸液濾頭置于脫氣后的流動(dòng)相中，按下排氣閥，設(shè)置流速5mL/min，讓流動(dòng)相持續(xù)沖洗泵體3-5分鐘，觀察排氣口無(wú)氣泡溢出后關(guān)閉排氣閥。進(jìn)樣閥排氣需在進(jìn)樣狀態(tài)下，用進(jìn)樣針抽取200μL流動(dòng)相，反復(fù)推注5-6次，將進(jìn)樣閥內(nèi)的氣泡排出。色譜柱排氣可通過(guò)提高柱溫至35℃，設(shè)置流速1mL/min，持續(xù)運(yùn)行30分鐘，使柱內(nèi)微小氣泡隨流動(dòng)相流出；若氣泡堵塞嚴(yán)重，可反接色譜柱，以2mL/min流速?zèng)_洗10分鐘，再正接恢復(fù)使用。檢測(cè)器流通池排氣需關(guān)閉檢測(cè)器，拆下流通池出口管路，用注射器從入口處緩慢推注流動(dòng)相，直至出口無(wú)氣泡流出，再重新連接管路。
部件檢修與參數(shù)優(yōu)化是長(zhǎng)效解決氣泡問(wèn)題的保障。定期檢查輸液泵密封圈、單向閥等易損部件，每使用3000小時(shí)更換一次密封圈，確保密封性良好；進(jìn)樣閥每使用5000次進(jìn)行密封性測(cè)試，若存在泄漏及時(shí)更換轉(zhuǎn)子。參數(shù)設(shè)置方面，流速應(yīng)根據(jù)色譜柱內(nèi)徑合理選擇，4.6mm內(nèi)徑色譜柱流速控制在0.8-1.2mL/min，避免湍流產(chǎn)生；柱溫箱溫度與檢測(cè)器溫度保持一致，溫差不超過(guò)5℃；梯度洗脫時(shí)，有機(jī)相比例變化速率控制在每分鐘5%-10%，減少溶劑混合產(chǎn)生的氣泡。
三、日常運(yùn)維與預(yù)防措施
氣泡問(wèn)題的預(yù)防重于處理，建立規(guī)范的日常運(yùn)維體系可使氣泡故障發(fā)生率降低70%以上。流動(dòng)相制備時(shí)，應(yīng)使用色譜純?nèi)軇旌蠒r(shí)采用緩慢攪拌方式，避免劇烈震蕩；制備完成后立即脫氣，脫氣后的流動(dòng)相在密封條件下儲(chǔ)存不超過(guò)24小時(shí)。實(shí)驗(yàn)前需對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行全面檢查，確認(rèn)儲(chǔ)液瓶液位充足、管路連接緊密、濾頭無(wú)堵塞；開機(jī)后先以低流速?zèng)_洗系統(tǒng)10分鐘，再進(jìn)行排氣操作。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用甲醇或乙腈沖洗系統(tǒng)30分鐘，避免流動(dòng)相殘留導(dǎo)致的氣泡問(wèn)題；長(zhǎng)期閑置設(shè)備時(shí)，需用純甲醇充滿管路與色譜柱，防止空氣進(jìn)入。
總之，液相色譜儀的氣泡問(wèn)題是多因素共同作用的結(jié)果，需從制備、操作、運(yùn)維全流程建立管控體系。通過(guò)精準(zhǔn)識(shí)別成因、采用科學(xué)的脫氣與排氣方法、強(qiáng)化日常維護(hù)，可有效解決氣泡干擾，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性，延長(zhǎng)設(shè)備使用壽命。對(duì)于復(fù)雜的氣泡故障，可結(jié)合壓力曲線變化與峰形特征精準(zhǔn)定位，必要時(shí)聯(lián)合設(shè)備廠商進(jìn)行專業(yè)檢修。
